Набор QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit обеспечивает очистку ДНК на основе спин колонки. Набор QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit предназначен для лабораторий, обрабатывающих кровь для диагностики in vitro.

Производительность

Геномная ДНК, очищенная с помощью набора QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit, готова к использованию в последующих приложениях, основанных на ферментативной амплификации, таких как ПЦР.

Образцы цельной крови можно собирать с помощью многих типов пробирок, содержащих антикоагулянт (ЭДТА или цитрат), включая пробирки BD Vacutainer, Monovette и Vacuette (см. таблицу). Образцы крови можно замораживать и размораживать не менее 3 раз, и они по-прежнему будут надежным источником для очистки ДНК (см. рисунок «ДНК из замороженной и размороженной крови»).

Забор крови с помощью различных пробирок

Primary tube Manufacturer Cat. no. Nominal volume Average yield from 200 µl
BD Vacutainer 9NC BD 366007 9 ml 6.4 µg
BD Vacutainer K3E BD 368457  10 ml 6.6 µg
BD Vacutainer K2E BD 367864    6 ml 6.4 µg
S-Monovette EDTA Sarstedt 02.1066.001 9 ml 6.5 µg
S-Monovette CPDA1 Sarstedt 01.1610.001 8.5 ml 6.3 µg
Vacuette K3E Greiner Bio-One 455036    9 ml 6.5 µg
Vacuette 9NC Greiner Bio-One 454382    2 ml 6.3 µg
Для каждого типа первичных пробирок была собрана кровь от 11 доноров. Для каждого донора ДНК очищали из 200 мкл образцов в трех экземплярах с помощью набора QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit и элюировали в 200 мкл элюирующего буфера. В таблице приведены средние выходы ДНК по 33 процедурам очистки.





Принцип

В мини-наборе QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit используется хорошо зарекомендовавшая себя технология QIAamp для очистки геномной ДНК. Мембрана QIAamp на основе диоксида кремния специфически связывает ДНК в лизированном образце, а остальной лизат быстро удаляется центрифугированием или вакуумом. Связанная ДНК эффективно промывается для удаления загрязнений и затем элюируется в объемах 50-200 мкл.




Протокол

 

Геномная ДНК очищается из крови с помощью одной из двух альтернативных процедур: с помощью центрифуги или с помощью вакуумного коллектора и центрифуги. Универсальная система очистки ДНК обеспечивает совместимость с другими продуктами для диагностики in vitro.

Образец крови, содержащий ЭДТА или цитрат (200 мкл), лизируют в присутствии протеазы QIAGEN и буфера для лизиса при 56°C в течение 10 минут. Затем в лизат добавляют этанол, чтобы оптимизировать связывание ДНК с мембраной QIAamp. Лизат наносят на спиновую колонку QIAamp Mini, которую затем центрифугируют или подвергают вакуумному давлению. ДНК связывается с мембраной QIAamp в спиновой колонке, а остальной лизат проходит через нее. Связанная ДНК эффективно вымывается двумя различными промывочными буферами, которые также проходят через мембрану QIAamp при центрифугировании или под вакуумом. Затем мембрана QIAamp высушивается центрифугированием. На мембрану QIAamp наносится элюирующий буфер (50-200 мкл), и после 1-минутной инкубации спин-колонка центрифугируется для элюирования чистой ДНК.

Очистка ДНК с помощью набора QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit может быть полностью автоматизирована на приборе QIAcube (Connect). При автоматизации работы с набором QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit на приборе QIAcube прибор может обработать менее 50 образцов из-за мертвых объемов, испарения и дополнительного расхода реагентов при автоматическом пипетировании. Компания QIAGEN гарантирует подготовку только 50 проб при ручном использовании набора QIAamp DSP DNA Blood Mini